การโคลนนิ่ง ตอน การโคลนนิ่งเเละขั้นตอนการโคลนนิ่งสัตว์

การโคลนนิ่ง

     การโคลนนิ่งเป็นเทคโนโลยีที่ไม่ได้มีความซับซ้อนอะไรมาก มีการทำมานานแล้วตั้งแต่สมัยโบราณ ซึ่งก็คือการโคลนนิ่งพืช เช่น การเพาะชำ การตอนกิ่ง ปัจจุบันมีการนำความรู้ทางวิทยาศาสตร์มากใช้มากขึ้นก็เกิดการพัฒนามาเป็นการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื้อ การโคลนนิ่งในสัตว์ก็มีหลักการคล้ายกันคือ การขยายพันธ์พืช/สัตว์โดยไม่อาศัยเซลล์พืช โดยสิ่งมีชีวิตที่ได้จากการโคลนจะมีลักษณะเหมือนต้นแบบทุกประการ

การทำโคลนนิ่งในสัตว์

    การทำโคลนนิ่งคือตอนเรียนนี้ตกใจเลยล่ะค่ะ มันง่ายเวอร์!!! อุปกรณ์และเครื่องมือต่างๆก็ไม่ได้เป็นเครื่องมือที่ใช้ยากอะไร ไม่ได้ใช้เทคนิคพิสดารตีหลังกาทำอะไรเลย

ขั้นตอนการทำโคลนนิ่ง(แบบคร่าวๆไม่ละเอียด)

1.       การเตรียนเซลล์ต้นแบบ (Donor)

     ทำการเนื้อเยื่อจากสัตว์ต้นแบบจะเป็นส่วนใดก็ได้แต่ที่นิยมทำกันจะเป็นเนื้อเยื่อส่วนใบหู ตัดออกมาเป็นชิ้นเล็กๆ  นำชิ้นเนื้อเยื่อมาเลี้ยงในน้ำยาเลี้ยงเซลล์ นำไปแช่ในอุณหภูมิที่เหมาะสม 10 วัน ครบสิ่งวันแล้วก็สามารถนำเซลล์ที่ได้มาไปใช้ได้แต่ ถ้าไม่ใช้ก็น้ำไปแช่แข็งเก็บไว้

2.      การเตรียมไซโตพลาส

     ปัญหาในขั้นตอนการเตรียมไซโตพลาสคือ จะไปหาเซลล์ไข่ได้จากที่ไหน? หากเป็นสัตว์เลี้ยงปตุสัตว์ก็สามารไปเก็บเอาไข่จากรังไข่ที่โรงฆ่าสัตว์ได้เลย สมมุติได้รังไข่มาแล้วก็จะนำรังไข่มาแช่เก็บไว้ใน 0.9%NaCl เพื่อรักษาสภาพไว้ จากนั้นจะใช้ follicle เส้นผ่าศูนย์กลาง 3-6 mm ดูดเซลล์ไข่ออกมา

3.      เลี้ยงไข่ให้สุกในหลอดแก้ว

เมื่อได้เซลล์ไข่มาแล้วจะนำมาเลี้ยงในน้ำยาเลี้ยง เอาไปอบในตู้ที่อุณหภูมิ  38.5 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 22 ชั่วโมง เซลล์ไข่ที่ได้จะมีเซลล์คิวมูลัสรอมรอบอยู่ เราจะทำการย่อยเซลล์คิวมูลัสด้วยเอ็นไซน์0.1%hyaluronidase in DPBS

4.      ดูดนิวเคลียสออก

    ในเซลล์ไข่ที่สุกแล้วจะมีบริเวณที่เรียกว่า 1^stPB ซึ่งบริเวณนี้จะแป็นบริเวณที่มีนิวเคลียลอยู่ การหา1^stPB จะทำได้โดยการนำเซลล์ไข่ไปส่องใต้แสง UV จะเห็นเป็นจุดเรืองแสง 2 จุดเล็ก

เทคนิคการดูดนิวเคลียสออกมามี 2 เทคนิค

1.       ใช้เข็มจิ้มแล้วกดออก

2.      ใช้หลอดดูดออก

5.      การฝากเซลล์

เมื่อได้เซลล์ไข่ที่ไม่มีนิเคลียสแล้วจะทำการใส่เซลล์ต้นแบบ (Donor) เข้าไป จากนั้นจะทำการเชื่อมด้วยกระแสไฟฟ้าอ่อน

6.      เลี้ยงตัวอ่อน

นำเซลล์ไข่จากการฝากเซลล์มาเลี้ยงในน้ำยา (มันเยอะมาก) 5 วัน

7.      การเตรียมตัวรับและการย้ายฝากตัวอ่อน

     เตรียมตัวรับให้มีวันเป็นสัต(ตกไข่) มีอายุเท่ากับตัวอ่อน คือในวันที่เริ่มการฝากเซลล์ต้องเตรียมตัวรับให้เป็นสัตในวันเดียวกัน เมื่อตัวรับพร้อมแล้วจะการย้ายฝากตัวอ่อน  การย้ายฝากตัวอ่อนก็ใช้เทคนิคและเคลื่องมือคล้ายๆกับการผมสเทียมที่ทำกันทั่วไป

8.      รอคลอด

สรุป